Molecular Diagnostics: real-time PCR

Sa kasalukuyan, molecular diagnostic mekanismo na dinisenyo polymerase chain reaction (PCR), na kung saan ay ang puwersa para sa pagbuo ng isang malaking bilang ng mga pamamaraan ng diagnosis ng sakit, batay sa pagpapasiya ng mga genetic na materyal. Para sa pagdala ng real-time PCR gamit gene fragment (sa partikular ang nucleic acid) ng kausatiba agent, na kung saan ay hindi nahanap sa iba pang mga indibidwal.

Ang prinsipyo ng PCR ay ang pagpaparami ng isang tiyak na milyon-milyong pathogen DNA fragment ng oras sa pamamagitan ng DNA polymerase sa isang espesyal na yunit, tinutukoy bilang ang thermal siklista, na kung saan ay nagbibigay ng isang cyclic na pag-uulit ng rehimen na temperatura para sa isang naibigay na programa.

Diagnostics PCR ay nagbibigay-daan upang ulitin ang isang serye ng mga ikalalakhan, pagpapanatili ng enzyme aktibidad. Kapag ang paglaki maganap nang maayos, sa isang ikot ng panahon ang bilang ng mga kopya ng isang partikular na piraso ng DNA ng doubles pathogen, pagkatapos ng tatlumpung siklo - isang daan at sampung. Iyon ay kung bakit PCR ay ginagamit sa diagnosis upang matukoy maliit na sapat na pathogens, ang pagkakakilanlan ng na kung saan ay imposible nang wala ito.

Dapat ito ay nabanggit na ang RNA ay hindi maaaring maging isang template para sa PCR sa real time. Samakatuwid, upang tuklasin ang viral RNA bago ang paglaki upang makakuha ng DNA sang-ayon sa nararapat na fragment ng mga ito. Ang polymerase chain reaction ay nagbibigay-daan upang makabuo ng DNA at RNA pagsukat pathogen. Ang impormasyon na kaya nakuha ay ginagamit para sa pagsubaybay ng pagiging epektibo ng therapy na ginamit, at ang pagsusuri ng mga klinikal na pagbabala.

Bilang karagdagan, real-time PCR ay hindi nangangailangan ng karagdagang mga aksyon na may paggalang sa decryption ng mga target DNA o amplicons, na magsilbi bilang isang barrier sa tamang diyagnosis at humahantong sa mga maling resulta. Diskarte na ito ay ginagawang posible na huwag gamitin ang electrophoresis hakbang, na hahantong sa isang panganib-pagbabawas ng mga produkto sa mga reaksyon polymerase chain. Gayundin, dahil sa ang pagbaba sa bilang ng mga manipulations na may mga ahente, binabawasan ang oras ng survey, ito pinapasimple ang proseso, binabawasan ang posibilidad ng mga error. Pinapayagan din ng PCR sa iyo upang tukuyin ang unang bilang ng mga kopya ng DNA ng pathogen sa isang klinikal na pagsubok upang makatulong na makilala tagal ng exacerbations at upang kumuha ng napapanahong hakbang upang gamutin ang mga pasyente.

Ngayon, may mga isang malaking bilang ng mga pamamaraan amplification ng pagkapirmi sa real time. Ang pinaka-karaniwang ginagamit sa iba't-ibang mga diskarte ng paglalapat amplicon sang-ayon sa fluorogenic probes, ang radiation intensity ng kung saan ay nag-iiba depende sa akumulasyon ng amplicon at nire-record sa real time sa pamamagitan ng isang espesyal na aparato na tinatawag na isang thermocycler na may isang optical module. Ito ay nagbibigay ng isang mataas na antas ng sensitivity ng pagtatasa. Kasabay ng produkto PCR ay maaaring napansin, kasama ang isang malaking dami ng mga by-produkto, sa isang pagkakataon kapag gumagamit ng electrophoresis ito sa ilang mga kaso ay hindi napansin.

Sa pamamagitan ng PCR gamit positibo at negatibong mga halimbawa control sa real time. Kaya, positibo at negatibong mga halimbawa sa isang pag-aaral na nasuri bilang mga hiwalay na mga halimbawa, ang isang control sample kung saan ay ipinakilala sa bawat isa tulad ng sample at magbabalik lahat ng mga hakbang na pagtatasa.

Ngayon, may mga isang malaking bilang ng mga aparato para isakatuparan ang polymerase chain reaction. Kasama sa mga ito Bio-Rad, Applied Biosystems, Cepheid at Roche. Ang bawat isa sa kanila ay may pakinabang at disadvantages

Dapat ito ay nabanggit na ang PCR - paraan ng diagnosis ginagamit sa malakihang pang-agham, pananaliksik at diagnostic centers sa buong mundo, dahil ito ay nagbibigay ng pagkakataon upang magsagawa ng agarang pagbibigay kahulugan ng ang mga resulta.